ИФА-Аскаридоз-IgG

Описание

ИФА-Аскаридоз-IgG Набор реагентов для выявления антител класса IgG к аскаридам

И Н С Т Р У К Ц И Я

по применению набора реагентов

«Тест-система иммуноферментная для выявления

 иммуноглобулинов класса G

к антигенам рода Askaris lumbricoides»

«ИФА-Аскаридоз-IgG«

 

Регистрационное удостоверение №РЗН 2016/4998 от 15.11.2016 г.

 

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Тест-система иммуноферментная  для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides»»ИФА-Аскаридоз-IgG» предназначен для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Ascaris lumbricoides в сыворотке (плазме) крови человека методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе при «ручной» постановке и с использованием ИФА-анализаторов.

                                                                     

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА
Иммуносорбент очищенный инактивированный антиген Ascaris lumbricoides, сорбированный  на 96-луночном разборном полистироловом планшете для иммунологических реакций с плоским дном 1 планшет
допускается раздельная упаковка стрипов (по 1-4 стрипа в пакете)
Контрольный положительный образец (К+) инактивированный; прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость красного цвета 1 фл.

(1,5 мл)

Контрольный отрицательный образец (К) инактивированный; прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость желтого цвета 1 фл.

(2,5 мл)

Конъюгат прозрачная или опалесцирующая жидкость зеленого цвета 1 фл. (14 мл)
25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином [ФСБ-Т(х25)] прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная пенящаяся жидкость, возможно выпадение осадка солей белого цвета, растворяющегося при температуре 37 0С в течение 30 мин 1 фл. (40 мл)
Раствор для разведения образцов (РРО) прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость фиолетового цвета 1 фл. (14 мл)
Раствор индикаторный (РИ); прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость 1 фл. (14 мл)
Стоп-реагент прозрачная бесцветная жидкость 1 фл.

(12,5 мл)

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

  1. ФСБ-Т(х25), РИ, стоп-реагент – унифицированы для всех наборов ЗАО «ЭКОлаб», в которых используются указанные реагенты.

Набор дополнительно укомплектован принадлежностями:

вспомогательными пластиковыми емкостями размером 100х50х19 мм (4 шт.),

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток на 4-200 мкл  (16 шт.);

клейкой пленкой для планшетов размером 85х135 мм (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовый вариант комплектации набора позволяет исследование 96 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы  используется 3 лунки). Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Число стрипов 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Число иссл. образцов 1-5 6-13 7-21 22-29 30-37 38-45 46-53 54-61 62-69 70-77 78-85 86-93

 

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

При наличии в исследуемом образце иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Ascaris lumbricoides происходит связывание их с антигеном Ascaris lumbricoides, сорбированным в лунках планшета-иммуносорбента, образовавшийся комплекс антиген-антитело реагирует с внесенным в реакционную среду раствором конъюгата – антителами против IgG человека, меченными пероксидазой хрена. Образовавшийся комплекс «антиген-антитело-конъюгат» выявляется в реакции с субстратно-индикаторным раствором, содержащим хромоген – тетраметилбензидин, в результате которой меняется цвет (оптическая плотность) реакционной смеси в лунке планшета; изменение регистрируется спектрофотометрически.

 

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

— Аналитическая чувствительность набора определяется по стандартной панели положительных сывороток предприятия, содержащих иммуноглобулины класса G к антигенам рода Ascaris lumbricoides (СОП+-154), как процентное содержание образцов, определенных набором как положительные, и составляет 100%.

— Аналитическая специфичность набора определяется по стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, не содержащих иммуноглобулины класса G к антигенам рода Ascaris lumbricoides (СОП—154) как процентное содержание образцов, определенных набором как отрицательные, и составляет 100%.

А) Диагностическая чувствительность

Статистическая достоверность результатов диагностической чувствительности испытаний составила:

 

 

 

Заключение Общее число клинических образцов с истинно положительными результатами анализа (n) Негативный

результат

Позитивный

результат

Диагностическая чувствительность

(с доверительной вероятностью 95%)

Положительных по иммуноглобулинам класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 990 0 990 99,77% — 100%

 

Статистическая достоверность диагностической чувствительности для каждого вида биологического материала составила:

Вид клинического материала Количество образцов от пациентов Общее количество образцов от пациентов Диагностическая чувствительность

(с доверительной вероятностью 95%), не менее %

При проведении клинических испытаний При проведении дополнительных клинических испытаний
Сыворотки, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 480 480 99,52
Образцы плазмы, содержащие иммуноглобулины класса G кантигенам рода Askaris lumbricoides 510 510 99,55

Диагностическая чувствительность для  клинических образцов составила:

Клинический

материал

Заключение Результаты испытаний
Диагностическая чувствительность

(с доверительной вероятностью 95%)

Сыворотка крови Выявленыиммуноглобулины класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 99,52% — 100%
Плазма крови Выявлены иммуноглобулины класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 99,55% — 100%

 

Б) Диагностическая специфичность

Неспецифичные реакции были зарегистрированы, таким образом, диагностическая специфичность при исследовании данных образцов, составила 98,94%.

Статистическая достоверность результатов диагностической специфичности испытаний с учетом ложноположительных результатов  составила:

Заключение Общее число клинических образцов с истинно отрицательными результатами анализа (n) Негативный

результат

Позитивный

результат[1]

Диагностическая специфичность

(с доверительной вероятностью 95 %)

Отрицательных по иммуноглобулинам класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 1318 1304 14 98,94% — 100%

 

Статистическая достоверность диагностической специфичности для каждого вида биологического материала составила:

Вид клинического материала Количество образцов Количество образцов, давших ложноположительный результат Общее количество образцов от пациентов Диагностическая специфичность

(с доверительной вероятностью 95%), не менее %

При проведении основных клинических испытаний При проведении дополнительных клинических испытаний При проведении основных клинических испытаний При проведении дополнительных клинических испытаний
Сыворотки,  не содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 480 0 0 0 480 99,52
Образцы плазмы, не содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 510 0 0 0 510 99,55
Сыворотки крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Opisthorchis 38 0 2 0 40 94,12
Сыворотки крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Toxocara

 

38 0 2 0 40 94,12
Сыворотки крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Trihinella 20 17 3 0 40 93,96
Сыворотки крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Echinococcus 40 0 0 0 40 94,41
Образцы плазмы крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Opisthorchis 40 0 2 0 42 94,40
Образцы плазмы крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Toxocara 40 0 2 0 42 94,40
Образцы плазмы крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Trihinella 39 0 3 0 42 94,27
Образцы плазмы крови человека, содержащие иммуноглобулины класса G к антигенам рода Echinococcus 42 0 0 0 42 94,67

 

Оценка результатов:

Полученные результаты показали, что диагностическая специфичность для  клинических образцов с учетом ложноположительных результатов составила:

Клинический

материал

Заключение Результаты испытаний
Диагностическая специфичность

(с доверительной вероятностью 95%)

Сыворотка крови Не выявлены иммуноглобулины  класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 98,90% — 100%
Плазма крови Не выявлены иммуноглобулины  класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides 98,97% — 100%

 

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Сбор образцов крови должен производиться в соответствии с надлежащей практикой методом венопункции (ГОСТ Р 53079.4-2008 «Обеспечение качества клинических лабораторных исследований»).

Нативная сыворотка и плазма  крови (гепарин, ЭДТА, цитрат натрия) человека объемом не менее 20 мкл.

Образцы сыворотки (плазмы)  крови до исследования можно хранить не более 7 сут. при температуре от 2 до 8 оС и 3 мес при температуре минус 20 оС или более низкой. Допускается только однократное замораживание-размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать.

Не допускается использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов и (или) с признаками гемолиза, и (или) с видимым микробным проростом.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом отцентрифугировать в течение 10-15  мин при 2500-3000 об/мин.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
И ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ С НАБОРОМ

Потенциальный риск применения набора – класс 2б (Приказ №4н от 06.06.12.).

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

К+,К- содержат натрия азид в конечной концентрации 0,01 %. Данная концентрация является безопасной.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

Набор реагентов, в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» относится к классу А — отходы, не имеющие контакта с биологическими жидкостями пациентов, инфекционными больными. Класс А – эпидемиологически безопасные отходы, приближенные по составу к твердым бытовым отходам (ТБО).

Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование и материалы (для «ручной» постановки)

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин.

Термостат на 37 оС, холодильник бытовой.

Фильтровальная бумага.

ИФА-анализатор.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.

Приготовление рабочих  растворов реагентов для ИФА

Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре  от 18 до 25 оС.

Приготовление рабочего промывочного раствора  (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) прогреть его при температуре  37 оС до  полного растворения осадка.

В зависимости от числа используемых стрипов отобрать необходимый объем концентрата и довести его водой очищенной до объема, указанного в табл. 1

Таблица 1

Реагент Объем реагента, мл,  на …..стрипов
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
ФСБ-Т(х25) 3 7 10 13 17 20 23 27 30 33 37 40
Вода очищенная до 75 до 175 до 250 до 325 до 425 до 500 до 575 до 675 до 750 до 825 до 925 до 1000

Готовый рабочий промывочный раствор хранить при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Приготовление остальных реагентов

Иммуносорбент, К+, К, , РРО, конъюгат, РИ, стоп-реагент – готовы к применению.

Проведение ИФА («ручная» постановка)

Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.

  1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов.
  2. Стрипы промыть 1 раз ФСБ-Т, внося в лунки 350-370 мкл раствора. При наличии промывателя, позволяющего производить промывку в режиме «Overflow», использовать именно этот режим. По окончании промывки остатки раствора удалить из лунок, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
  3. Внести в три лунки контрольные образцы (в одну лунку – 100 мкл К+, в две лунки – по 100 мкл К). В остальные лунки внести по 100 мкл РРО. Затем в лунки с РРО внести по 10 мкл исследуемых образцов, содержимое лунок перемешать пипетированием (при этом цвет РРО должен измениться).

Примечание. При постановке ИФА на одном стрипе допускается использовать по 1 лунке на каждый контрольный образец.

  1. Планшет закрыть крышкой или заклеить клейкой лентой. Инкубировать 30 мин при температуре 37оС в защищенном от света месте.
  2. С помощью промывателя удалить образцы из лунок, 5 раз промыть планшет промывочным раствором, как указано в п. 2.
  3. В лунки внести по 100 мкл конъюгата. Инкубировать 30 мин при температуре 37оС в защищенном от света месте.
  4. С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 5 раз промыть планшет как указано в п. 2.
  5. Во все лунки внести по 100 мкл раствора индикаторного, немедленно поместить планшет в защищенное от света место и выдержать 15 мин при температуре 37оС.
  6. Во все лунки (в той же последовательности, с которой вносился субстратно-индикаторный раствор) внести по 100 мкл стоп-реагента, осторожно (постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок и не более чем через 5 мин приступить к учету результатов.
Регистрация и учет результатов

Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн – 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм ОП измерять при длине волны 450 нм, а выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществлять по воздуху.

Результаты ИФА учитываются только при следующих условиях:

среднее значение ОП(К+) – не менее 0,50;

среднее значение ОП(К) – не более 0,20,

В противном случае исследование необходимо повторить.

Рассчитать критическое значение оптической плотности, ОПкрит., по формуле

ОПкрит.= ОПК‾ср+ 0,35

где ОПК‾ср – среднее значение ОП в лунках с К‾;

0,35 – коэффициент, полученный экспериментальным путем.

При ОПиссл.обр больше 1,2×ОПКрит образец считается положительным и содержащим иммуноглобулины к Ascaris lumbricoides.

При ОПиссл.обр меньше 0,9×ОПКрит образец считается отрицательным, т.е. не содержащим иммуноглобулины к Ascaris lumbricoides.

При ОПиссл.обр в интервале от 0,9×ОПКрит до 1,2×ОПКрит образец считается сомнительным; исследование такого образца рекомендуется повторить.

Интерпретацию результатов анализа проводит лечащий врач с учетом клинических признаков  и результатов прямых методов анализа (дуоденальное зондирование, копроовоскопия).

Следует учитывать возможность перекрестных серологических реакций при заболеваниях описторхозом, трихинеллезом, токсокарозом  и эхинококкозом. Это может быть связано как с совместной инвазией, так и с взаимодействием антител с гетерологичными антигенами за счет наличия общих антигенных компонентов.

Титрование положительного образца

Тест-система позволяет выполнить определение титра антител в выявленном положительном образце. Для этого, на отдельном стрипе необходимо провести ИФА с соответствующим образцом в последовательных двукратных разведениях его раствором РРО от 1:10 до 1:1280.

Для приготовления указанных разведений в верхнюю лунку стрипа внести 180 мкл раствора РРО, в остальные лунки стрипа – по 100 мкл раствора РРО. Затем в верхнюю лунку стрипа внести 20 мкл выявленного положительного образца, тщательно перемешать пипетированием и перенести 100 мкл полученного разведения (1:10) во вторую лунку, тщательно перемешать пипетированием, перенести 100 мкл полученного разведения (1:20) в третью лунку и так – до последней лунки стрипа. Из последней лунки стрипа отобрать 100 мкл разведения (1:1280) и слить его в дезинфицирующий раствор.

Далее провести ИФА как указано в п. Проведение ИФА («ручная» постановка).

 

ПОСТАНОВКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИФА-АНАЛИЗАТОРОВ

Подготовить прибор в соответствии с инструкцией по его эксплуатации, ввести программу анализа, соответствующую используемому набору, и провести анализ.

 

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

 

Хранение

В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 оС. Замораживание не допускается.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 оС до истечения срока годности.

 

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 оС транспортом всех видов в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 оС в течение 10 сут.

 

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

 

ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ

По вопросам, касающимся качества и обращения набора реагентов  «Тест-система иммуноферментная  для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Askaris lumbricoides»»ИФА-Аскаридоз-IgG», следует обращаться по адресу 142530 Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1. ЗАО «ЭКОлаб»; тел. (49643) 3-23-11, факс (49643) 3-30-93 – отдел сбыта, (49643) 3-37-30 – ОБТК.

[1] Ложноположительные результаты

Скачать Инструкцию 

Скачать РУ



Рекомендуемые Товары