ИФА-Описторхоз-lgG

Описание

И Н С Т Р У К Ц И Я по применению набора реагентов «Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Opisthorchis» «ИФА-Описторхоз-lgG»

Регистрационное удостоверение №РЗН 2016/4997 от 15.11.2016 

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов  «Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Opisthorchis» «ИФА-Описторхоз- IgG» предназначен для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Opisthorchis в сыворотке (плазме) крови человека методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) при «ручной» постановке и с использованием ИФА-анализаторов.

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

Иммуносорбент очищенный инактивированный антиген описторхисов сорбированный  на 96-луночном разборном полистироловом планшете для иммунологических реакций с плоским дном 1 планшет
допускается раздельная упаковка стрипов (по 1-4 стрипа в пакете)
Контрольный положительный образец (К+) инактивированный; прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость красного цвета 1 фл. (1,5 мл)
Контрольный отрицательный образец (К) инактивированный; прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость желтого цвета 1 фл. (2,5 мл)
Конъюгат прозрачная или опалесцирующая жидкость зеленого цвета 1 фл. (14 мл)
25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином [ФСБ-Т(х25)] прозрачная или слегка опалесцирующая пенящаяся жидкость, возможно выпадение осадка солей белого цвета, растворяющегося при температуре 37 0С в течение 30 мин. 1 фл. (40 мл)
Раствор для разведения образцов (РРО) прозрачная или опалесцирующая жидкость фиолетового цвета 1 фл. (14 мл)
Раствор индикаторный (РИ); прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость 1 фл. (14 мл)
Стоп-реагент прозрачная бесцветная жидкость 1 фл. (12,5 мл)

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

  1. ФСБ-Т(х25), РИ, стоп-реагент – унифицированы для всех наборов ЗАО «ЭКОлаб», в которых используются указанные реагенты.

 

 

Набор дополнительно укомплектован принадлежностями:

вспомогательными пластиковыми емкостями размером 100х50х19 мм (4 шт.),

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток   (16 шт.);

клейкой пленкой для планшетов размером 85х135 мм (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовый вариант комплектации набора позволяет исследование 96 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы  используется 3 лунки). Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Число

стрипов

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Число иссл. образцов 1-5 6-13 14-21 22-29 30-37 38-45 46-53 54-61 62-69 70-77 78-85 86-93

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ ИФА-Описторхоз-lgG

При наличии в исследуемом образце иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Opisthorchis происходит связывание их с антигенами описторхисов, сорбированными в лунках планшета-иммуносорбента, образовавшийся комплекс антиген-антитело реагирует с внесенным в реакционную среду раствором конъюгата – антителами к IgG человека, меченными пероксидазой. Образовавшийся комплекс «антиген-антитело-конъюгат» выявляется в реакции с субстратно-индикаторным раствором, содержащим хромоген – тетраметилбензидин, в результате которой меняется цвет (оптическая плотность) реакционной смеси в лунке планшета; изменение регистрируется спектрофотометрически.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Аналитическая чувствительность набора определяется по стандартной панели положительных сывороток предприятия, содержащих иммуноглобулины класса G к антигенам рода Opisthorchis (СОП+-174), как процентное содержание образцов, определенных набором как положительные, и составляет 100%.

Аналитическая специфичность набора определяется по  стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, не содержащих иммуноглобулины класса G к антигенам рода Opisthorchis (СОП-174) как процентное содержание образцов, определенных набором как отрицательные, и составляет 100%.

Диагностическая чувствительность (с доверительной вероятностью 95%) составила:

Сыворотка крови человека-99,52% — 100%

Плазма крови человека- 99,55% — 100%

Диагностическая специфичность (с доверительной вероятностью 95%) составила:

Сыворотка крови человека-99,64% — 100%

Плазма крови человека-99,66% — 100%

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Нативная сыворотка (плазма) крови человека объемом не менее 40 мкл.

Образцы сыворотки (плазмы)  крови до исследования можно хранить не более 7 сут. при температуре от 2 до 8 оС и 3 мес при температуре минус 20 оС или более низкой. Допускается только однократное замораживание-размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать.

Не допускается использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов и (или) с признаками гемолиза, и (или) с видимым микробным проростом.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом отцентрифугировать в течение 10-15  мин при 2500-3000 об/мин.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

И ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ С НАБОРОМ ИФА-Описторхоз-lgG

Потенциальный риск применения набора – класс 2б (Приказ №4н от 06.06.12.).

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ ИФА-Описторхоз-lgG

Оборудование и материалы

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 оС, холодильник бытовой, фильтровальная бумага, ИФА-анализатор.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.

Приготовление рабочих  растворов реагентов для ИФА

Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре  от 18 до 25 оС.

Приготовление рабочего промывочного раствора  (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) прогреть его при температуре  37 оС до  полного растворения осадка.

В зависимости от числа используемых стрипов отобрать необходимый объем концентрата и довести его водой очищенной до объема, указанного в табл. 1

Таблица 1

Реагент Объем реагента, мл,  на …..стрипов
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
ФСБ-Т(х25) 3 7 10 13 17 20 23 27 30 33 37 40
Вода очищенная до 75 до 175 до 250 до 325 до 425 до 500 до 575 до 675 до 750 до 825 до 925 до 1000

Готовый рабочий промывочный раствор хранить при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Приготовление остальных реагентов

Иммуносорбент, К+, К, РРО, конъюгат, РИ, стоп-реагент – готовы к применению.

Проведение ИФА («ручная» постановка)

Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.

  1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов.
  2. Стрипы промыть 1 раз ФСБ-Т, внося в лунки 350-370 мкл раствора. При наличии промывателя, позволяющего производить промывку в режиме «Overflow», использовать именно этот режим. По окончании промывки остатки раствора удалить из лунок, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
  3. Внести в три лунки контрольные образцы (в одну лунку – 100 мкл К+, в две лунки – по 100 мкл К). В остальные лунки внести по 100 мкл РРО. Затем в лунки с РРО внести по 20 мкл исследуемых образцов, содержимое лунок перемешать пипетированием (при этом цвет РРО должен измениться).

Примечание. При постановке ИФА на одном стрипе допускается использовать по 1 лунке на каждый контрольный образец.

  1. Планшет закрыть крышкой или заклеить клейкой лентой. Инкубировать 30 мин при температуре 37оС в защищенном от света месте.
  2. С помощью промывателя удалить образцы из лунок, 5 раз промыть планшет промывочным раствором, как указано в п. 2.
  3. В лунки внести по 100 мкл конъюгата. Инкубировать 30 мин при температуре 37оС в защищенном от света месте.
  4. С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 5 раз промыть планшет как указано в п. 2.
  5. Во все лунки внести по 100 мкл раствора индикаторного, немедленно поместить планшет в защищенное от света место и выдержать 15 мин при температуре 37оС.
  6. Во все лунки (в той же последовательности, с которой вносился субстратно-индикаторный раствор) внести по 100 мкл стоп-реагента, осторожно (постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок и не более чем через 5 мин приступить к учету результатов.

Регистрация и учет результатов

Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн – 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм ОП измерять при длине волны 450 нм, а выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществлять по воздуху.

Результаты ИФА учитываются только при следующих условиях:

среднее значение ОП(К+) – не менее 0,50;

среднее значение ОП(К) – не более 0,20,

В противном случае исследование необходимо повторить.

Рассчитать критическое значение оптической плотности, ОПкрит., по формуле

ОПкрит.= ОП(К‾ср)+0,35,

где ОП(К‾ср) – среднее значение ОП в лунках с К‾;

0,35 – коэффициент, полученный экспериментальным путем.

При ОПиссл.обр больше 1,2×ОПКрит образец считается положительным и содержащим иммуноглобулины класса G к антигенам Opisthorchis.

При ОПиссл.обр меньше 0,9×ОПКрит образец считается отрицательным, т.е. не содержащим иммуноглобулины класса G к антигенам Opisthorchis.

При ОПиссл.обр в интервале от 0,9×ОПКрит до 1,2×ОПКрит образец считается сомнительным; исследование такого образца рекомендуется повторить.

Интерпретацию результатов анализа проводит лечащий врач с учетом клинических признаков  и результатов прямых методов анализа (дуоденальное зондирование, копроовоскопия).

Следует учитывать возможность перекреста иммунологических реакций при заболеваниях аскаридозом, трихинеллезом, токсокарозом  и эхинококкозом. Это может быть связано как с совместной инвазией, так и с  взаимодействием антител с гетерологичным антигеном за счет наличия общих антигенных компонентов.

Титрование положительного образца

Тест-система позволяет выполнить определение титра антител в выявленном положительном образце. Для этого, на отдельном стрипе необходимо провести ИФА с соответствующим образцом в последовательных двукратных разведениях его раствором РРО от 1:10 до 1:1280.

Для приготовления указанных разведений в верхнюю лунку стрипа внести 180 мкл раствора РРО, в остальные лунки стрипа – по 100 мкл раствора РРО. Затем в верхнюю лунку стрипа внести 20 мкл выявленного положительного образца, тщательно перемешать пипетированием и перенести 100 мкл полученного разведения (1:10) во вторую лунку, тщательно перемешать пипетированием, перенести 100 мкл полученного разведения (1:20) в третью лунку и так – до последней лунки стрипа. Из последней лунки стрипа отобрать 100 мкл разведения (1:1280) и слить его в дезинфицирующий раствор.

Далее провести ИФА как указано в п. Проведение ИФА («ручная» постановка).

ПОСТАНОВКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИФА-АНАЛИЗАТОРОВ

Подготовить прибор в соответствии с инструкцией по его эксплуатации, ввести программу анализа, соответствующую используемому набору, и провести анализ.

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ

Хранение

Хранение наборов должно осуществляться в холодильных камерах или холодильниках, обеспечивающих регламентируемый температурный режим, в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 оС в течение всего срока годности.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках в холодильных камерах или холодильниках, обеспечивающих регламентируемый температурный режим, при температуре от 2 до 8 оС до истечения срока годности.

Транспортирование

Транспортирование наборов – при температуре от 2 до 8 оС транспортом всех видов в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида. Допускается транспортирование при температуре  от 9 до 25 оС в течение 10 сут.

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

По вопросам, касающимся качества и обращения набора «Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса G к антигенам рода Opisthorchis «ИФА-Описторхоз-IgG», следует обращаться по адресу 142530 Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1. ЗАО «ЭКОлаб»; тел.(49643) 3-23-11, факс (49643) 3-30-93 – отдел сбыта, (49643) 3-37-30 – ОБТК.

  

КРАТКАЯ СХЕМА ПОСТАНОВКИ ИФА

(«ИФА-Описторхоз-IgG»)

Использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией!

Промыть 1 раз промывочным раствором
Внести в три лунки контрольные образцы (в одну лунку – 100 мкл К+, в две лунки – по 100 мкл К); в остальные лунки внести по 100 мкл РРО. Затем  в лунки с РРО внести по 20 мкл исследуемых образцов
Инкубация 30 мин, 37 0С
Промыть 5 раз промывочным раствором
Внести по 100 мкл конъюгата в каждую лунку
Инкубация 30 мин, 37 0С
Промыть 5  раз промывочным раствором
Внести по 100 мкл индикаторного раствора в каждую лунку
Инкубация 15 мин, 37 0С
Внести по 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку
Измерить ОП при 450 нм (референс 620-650 нм), «бланк» — по воздуху.

 

Скачать Инструкцию 

Скачать РУ

ИФА-Описторхоз-lgG



Рекомендуемые Товары