Агар Клиглера-ГРМ Оболенск
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для бактериологических исследований
«Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая
Агар Клиглера-ГРМ Оболенск»
(дата утверждения 10.01.2007 г., дата актуализации 01.02.2017 г.)
-
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Агар Клиглера-ГРМ Оболенск)» предназначен для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью идентификации энтеробактерий по их способности ферментировать лактозу, глюкозу, образовывать газ и сероводород при диагностике инфекционных заболеваний «in vitro».
- характеристика набора
Агар Клиглера-ГРМ Оболенск представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок кремового цвета.
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Совокупность компонентов, входящих в состав набора, обеспечивает питательные потребности для роста и идентификации по биохимическим свойствам отдельных видов микроорганизмов.
2.2. СОСТАВ набора
Агар Клиглера-ГРМ Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:
I вариант.
| Панкреатический гидролизат рыбной муки жидкий ………… | 20,0 |
| Д (+)-лактоза, 1-водная ……………………………………… | 20,0 |
| Натрия хлорид ………………………………………………… | 5,0 |
| Натрия тиосульфат …………………………….……………. | 0,3 |
| Глюкоза …………………………………………………..….. | 1,0 |
| Железа окисного цитрат…………………………………………………… | 0,3 |
| Феноловый красный……………………………………………………….. | 0,05 |
| Натрия сульфит……………………………………………………………….. | 0,5 |
| Натрия карбонат……………………………………………………………… | 0,01-0,25 |
| Агар микробиологический ………………………………….. | 10,0±3,0 |
II вариант.
| Панкреатический гидролизат рыбной муки с тиосульфатом натрия сухой…………………………………………………………………… |
20,5 |
| Дрожжевой экстракт ………………………………………… | 3,0 |
| Д (+)-лактоза, 1-водная ………………………………………. | 20,0 |
| Натрия хлорид .………………………………………………. | 3,0 |
| Глюкоза ……………………………………………………….. | 1,0 |
| Железа сульфат, 7-водное …………………………..……….. | 0,2 |
| Железа окисного цитрат………………………………………………….. | 0,1 |
| Феноловый красный……………………………………………………….. | 0,05 |
| Натрия сульфит………………………………………………………………. | 0,5 |
| Натрия карбонат……………………………………………………………… | 0,01-0,25 |
| Агар микробиологический ………………………………….. | 10,0±3,0 |
рН от 7,2 до 7,6
Определение pH проводят потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода в соответствии с МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» в экстракте, приготовленном путем добавления к 2,00 г сухого агара Клиглера-ГРМ 100 мл дистиллированной воды, настаивания с периодическим перемешиванием в течение 1 ч при температуре 18-25 °С и последующего фильтрования через бумажный фильтр.
Величина рН, определенная по МУК 4.2.2316-08, является условной величиной, которая соответствует значению рН готовой среды и может незначительно меняться после стерилизации. Пределы значения рН, указанные выше, учитывают отклонения рН после стерилизации среды.
-
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Агар Клиглера-ГРМ Оболенск обеспечивает во всех засеянных пробирках рост каждого тест-штамма Salmonella typhi «bismuth», Salmonella paratyphi B 8006, Shigella sonnei
«S form», Escherichia coli 3912/41(055:K59), Providencia alcalifaciens 1068-50 (Proteus inconstans 1068-50), Proteus mirabilis Сиднеев, Pseudomonas aeruginosa 613-60 при посеве культуры по одной бактериологической петле диаметром 2 мм не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С со следующими биохимическими характеристиками:
- typhi «bismuth» не расщепляет лактозу, ферментирует глюкозу без образования газа, слабо продуцирует сероводород;
- paratyphi B 8006 не расщепляет лактозу, ферментирует глюкозу с образованием газа, продуцирует сероводород.
- coli 3912/41 (055:K59) ферментирует лактозу, глюкозу с образованием газа, не продуцирует сероводород.
- sonnei «S form» не расщепляет лактозу, ферментирует глюкозу без образования газа, не продуцирует сероводород;
- P. alcalifaciens 1068-50 не расщепляет лактозу, ферментирует глюкозу со слабым газообразованием, не продуцирует сероводород;
- mirabilis Сиднеев не расщепляет лактозу, ферментирует глюкозу с образованием газа, продуцирует сероводород;
- aeruginosa 613-60 не ферментирует лактозу, глюкозу, газа не образует, не продуцирует сероводород.
- МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Агар Клиглера-ГРМ относится к медицинским изделиям с низким индивидуальным риском и низким риском для общественного здоровья – класс 1.
При работе с музейными и выделенными штаммами микроорганизмов необходимо соблюдение СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами ΙΙΙ-ΙV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
-
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
- Весы лабораторные 2 класса точности
- Автоклав
- Пробирки стеклянные
- Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
- Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
- Чашки Петри стерильные
- Вода дистиллированная
- Колбы
- Воронки стеклянные
- АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Чистые культуры микроорганизмов, выделенные из объектов исследования в клинической и санитарной микробиологии.
6.2. Взятие, посев и хранение исследуемого материала проводят в соответствии с приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» и другими нормативными документами.
- Проведение АНАЛИЗа
Исследование проводят в условиях бактериологической лаборатории медицинскими специалистами, имеющие разрешение на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности.
7.1. Приготовление агара Клиглера-ГРМ.
Препарат в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 2-3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по 7,0 мл в пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 112 °С в течение 20 мин. После стерилизации среду в пробирках скашивают, оставив столбик высотой 25-30 мм. Готовая среда имеет красный цвет.
Стерильную среду можно использовать в течение 3-х недель при условии ее хранения при температуре 2-8 C или в течение 3 суток при температуре хранения 18-25 °С (хранить пробирки следует в темном месте).
После каждого вскрытия и проведения необходимых исследований банку со средой плотно закрыть и поместить на дальнейшее хранение.
7.2. После соответствующей подготовки по п. 6.2 настоящей инструкции исследуемый материал по одной бактериологической петле культуры каждого тест-штамма с питательного агара засевают в три пробирки с агаром Клиглера-ГРМ, нанося материал сначала штрихом на скошенную поверхность, а затем уколом в столбик среды, не касаясь дна пробирки. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 48 ч.
-
РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят визуально каждые сутки, но не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) ° С. Ферментацию лактозы учитывают на скошенной части агара Клиглера-ГРМ (среда желтеет), глюкозы – в столбике (среда желтеет), газообразование – по появлению пузырьков воздуха или разрыва среды в столбике, образование сероводорода – по почернению среды в столбике, а при слабом образовании – по почернению на границе столбика и скошенной части среды или, реже, на дне пробирки. В случае отрицательной реакции среда остается красной, либо скошенная поверхность приобретает малиновый оттенок.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее, чем в трех повторностях.
-
УТИЛИЗАЦИЯ
Серии агара Клиглера-ГРМ, пришедшие в негодность (нарушение целостности упаковки), а также в связи с истекшим сроком годности, утилизируются в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «А» – эпидемиологически безопасные отходы, любым способом, предотвращающим повторное использование, например, сжиганием.
Уничтожение агара Клиглера-ГРМ после проведения биологического контроля осуществляется по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «Б» с обязательным предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение
2 ч при температуре (126±1) ˚С.
Обращение с медицинскими отходами следует выполнять согласно схеме, принятой в конкретной организации, осуществляющей медицинскую и (или) фармацевтическую деятельность. Данная схема разрабатывается в соответствии с требованиями вышеуказанных санитарных правил и утверждается руководителем организации.
-
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ ИЗДЕЛИЯ
Агар Клиглера-ГРМ Оболенск необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С и относительной влажности не более 60 %. После вскрытия банку со средой хранят до истечения срока годности плотно закрытой, в сухом месте при температуре от 2 до 30 С, избегая попадания влаги.
Агар Клиглера-ГРМ транспортируют всеми видами крытого транспорта при температуре хранения.
Срок годности: 3 года. Среда с истекшим сроком годности и в поврежденной упаковке использованию не подлежит.
Изготовитель гарантирует соответствие Агара Клиглера-ГРМ заявленным в ТУ 9398-030-78095326-2007 требованиям и функциональным характеристикам с начала использования в течение всего срока годности и при соблюдении условий хранения и транспортирования.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
По вопросам, касающимся качества набора реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Агар Клиглера-ГРМ)», получения консультации и поддержки следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.
