ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований Питательная среда для выделения сальмонелл сухая Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск
НАЗНАЧЕНИЕ
Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск предназначен для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения сальмонелл из исследуемого материала.
- характеристика
Висмут-сульфит-ГРМ агар представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-желтого цвета, получаемый смешиванием сухих компонентов.
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Свежеприготовленная среда, благодаря бриллиантовой зелени и висмуту лимоннокислому, входящих в состав среды, обладает сильным ингибирующим эффектом в отношении сопутствующей микрофлоры.
Дифференцирующее действие среды основано на том, что образуемый бактериями из сульфата железа сероводород, вызывает почернение индикатора – цитрата висмута – вследствие перехода его в сульфид висмута, вещество черного цвета. Поэтому бактерии, образующие сероводород, формируют черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском. Среда под колониями, при этом, окрашена в черный цвет.
2.2. СОСТАВ
Висмут-сульфит-ГРМ агар представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбной муки……………… | 24,0 |
Экстракт пекарных дрожжей ……………………………….. | 1,0 |
Натрия хлорид …………………………………………… | 2,0 |
Д-глюкоза .…………………….………………….….…. | 4,5 |
Натрия гидрофосфат …………………………………… | 2,0 |
Натрия сульфит …………………………………………….. | 4,0 |
Висмут лимоннокислый . ……………………………… | 1,7 |
Железо (II) сернокислое 7-водное …………………….. | 0,6 |
Бриллиантовый зеленый ……..………………………… | 0,010-0,015 |
Натрий углекислый ..……………………………….…. | 0,4-0,7 |
Агар микробиологический ……………………….…… | 11,0±3,0 |
- АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Висмут-сульфит-ГРМ агар обеспечивает на всех засеянных чашках Петри рост тест-штаммов сальмонелл и их четкую дифференциацию от кишечной палочки не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С. На среде отсутствует рост стафилококков, некоторых клебсиелл, подавляется роение протея и частично рост эшерихий.
-
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
При анализе исследуемого материала – соблюдение СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности и гельминтами».
-
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
- Весы лабораторные 2 класса точности
- Автоклав
- Пробирки стеклянные
- Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
- Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
- Чашки Петри стерильные
- Вода дистиллированная
- Колбы
- Воронки стеклянные
-
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.
-
Проведение АНАЛИЗа
7.1. Приготовление среды Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск.
Порошок в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии, тщательно размешивают в 1 л воды дистиллированной, кипятят при постоянном перемешивании в течение 3 мин до полного расплавления агара. Охлаждают до температуры 45-50 °С, взбалтывают, разливают в нестерильные чашки Петри слоем 4-5 мм и оставляют на рабочем столе с открытыми крышками для застывания и подсушивания среды в течение 90-100 мин при температуре 18-25 °С. Готовая среда в чашках непрозрачная зелено-желтого цвета.
Готовую среду можно использовать в течение 3 суток при температуре хранения от 2 до 25 °С (хранить в защищенном от света месте).
7.2. Взятие, посев инфицированного материала и учет результатов производят в соответствии с «Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями» (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
7.3. Исследуемый материал тонким слоем распределить шпателем по поверхности чашек Петри с Висмут-сульфит-ГРМ агаром (при необходимости сделать разведения). Инкубировать при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч.
-
РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят визуально через 24-48 ч инкубации при температуре
(37±1) °С. Сальмонеллы, продуцирующие сероводород, на Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск образуют круглые или полиморфные, черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском, и окрашиванием среды под колониями в черный цвет; сальмонеллы, не продуцирующие сероводород, образуют круглые зеленые или темно-зеленые колонии. Колонии эшерихий круглые, зеленовато-коричневые.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее, чем в трех повторностях.
-
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.
Срок годности – 3 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
По вопросам, касающимся качества Висмут-сульфит-ГРМ агара в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.