Диагностикум ТИФИ к-т № 7 (ЭКОлаб) к жгут антигену 23.07
Диагностикум ТИФИ к-т № 8 (ЭКОлаб) к сомат. антигену 23.08
ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения антител к бактериальным антигенам в реакции агглютинации (Анти-Бактантиген-тест)
Рекомендована к утверждению Научно-экспертным советом по медицинским изделиям
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор применяется для качественного и полуколичественного определения антител к Н-антигену Salmonella paratyphi A (комплект № 1), О-антигенам (О1, О2, О12) Salmonella paratyphi A (комплект № 2), Н-антигену Salmonella paratyphi В (комплект № 3), О-антигенам (О1, О4, О5, О12) Salmonella paratyphi В (комплект № 4), Н-антигену Salmonella paratyphi C (комплект № 5), О-антигенам (О6, О7) Salmonella paratyphi C (комплект № 6), Н-антигену Salmonella typhi (комплект № 7), О-антигенам (О1, О9, О12) Salmonella typhi (комплект № 8), соматическим антигенам Brucella abortus (комплект № 9), соматическому антигену Proteus ОХ2 (комплект № 10), соматическому антигену Proteus ОХ19 (комплект № 11) и соматическому антигену Proteus ОХК (комплект № 12) в сыворотке крови человека.
При качественном определении каждый комплект рассчитан на проведение 250 исследований, включая контрольные образцы.
ПРИНЦИП МЕТОДА
При наличии в исследуемом образце антител к указанным выше антигенам они взаимодействуют с антигенами стандартизованных суспензий соответствующих убитых и окрашенных бактериальных клеток. Результатом взаимодействия является агглютинация бактериальных клеток с образованием хлопьевидных (Н-агглютинация) или плотных (О-агглютинация) агрегатов, различимых визуально.
СОСТАВ НАБОРА
Выпускается в виде 12 комплектов (№№ 1-12), в состав которых входят
Реагент 1-1 (Salmonella paratyphi AН-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella paratyphi A, несущих жгутиковый (Н) а-антиген; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-2 (Salmonella paratyphi AО-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella paratyphi A, несущих соматические антигены О1, О2, О12; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-3 (Salmonella paratyphi ВН-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella paratyphi A, несущих жгутиковый (Н) b-антиген; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-4 (Salmonella paratyphi BО-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella paratyphi В, несущих соматические антигены О1, О4, О5, О12; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-5 (Salmonella paratyphi СН-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella paratyphi С, несущих жгутиковый (Н) c-антиген; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-6 (Salmonella paratyphi СО-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella paratyphi С, несущих соматические антигены О6, О7; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-7 (Salmonella typhi Н-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella typhi, несущих жгутиковый (Н) d-антиген; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-8 (Salmonella typhi О-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Salmonella typhi , несущих соматические антигены О1, О9, О12; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-9 (Brucella abortus-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Brucella abortus; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-10 (Proteus ОХ2-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Proteus, несущих соматический антиген ОХ2; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-11 (Proteus ОХ19-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Proteus, несущих соматический антиген ОХ19; 1 флакон (5,0 мл),
или реагент 1-12 (Proteus ОХК-реагент) – суспензия убитых и окрашенных клеток Proteus, несущих соматический антиген ОХК; 1 флакон (5,0 мл).
Примечание: Реагенты 1-1, 1-3, 1-5 (Н-антигены) – гомогенные суспензии бордового цвета, при хранении разделяются на осадок бордового цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и бесцветную, прозрачную или слегка опалесцирующую надосадочную жидкость. Реагенты 1-2, 1-4, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 1-11 и 1-12 (соматические антигены) – гомогенные суспензии синего цвета, при хранении разделяются на осадок синего цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и бесцветную, прозрачную или слегка опалесцирующую надосадочную жидкость.
Реагент 2 (К+) – поливалентный положительный контрольный образец, содержащий антитела к жгутиковым (Н) и соматическим (О) антигенам Salmonella paratyphi A, В, С, Salmonella typhi, соматическим антигенам Proteus Х2, Х12, ХК и Brucella abortus; прозрачная бесцветная или слегка желтоватая жидкость; 1 флакон (1,0 мл).
Реагент 3 (К–) – отрицательный контрольный образец, сыворотка крови здоровых доноров, не содержащая антитела к жгутиковым (Н) и соматическим (О) антигенам Salmonella paratyphi A, В, С, Salmonella typhi, соматическим антигенам Proteus Х2, Х12, ХК и Brucella abortus; прозрачная бесцветная или слегка желтоватая жидкость; 1 флакон (1,0 мл).
Слайды для постановки реакции – 32 шт.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ
Используется свежеполученная сыворотка крови. Использование в качестве образцов плазмы крови не допускается. Забор крови должен быть произведен согласно стандартной процедуре. Образцы могут храниться 8 дней при температуре от 2 до 8оС или 3 месяца при температуре минус 20оС. Не подвергать образцы повторному замораживанию и оттаиванию.
Исследуемая сыворотка должна быть прозрачной и не содержать взвешенных частиц.
Образцы, содержащие осадок, перед анализом должны быть отцентрифугированы в течение 5 мин при 5-10 тыс. об/мин
Не использовать гемолизированные или загрязненные образцы
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Потенциальный риск применения набора – класс 2а.
Реагенты 1, 2 и 3 содержат азид натрия – вещество, токсичное при попадании внутрь.
Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
· Пробирки стеклянные (12х100 мм).
· Шейкер орбитальный с амплитудой колебаний 10-20 мм.
· Термостат на 37 оС или водяная баня на 48-50 оС.
· Градуированные пипетки 2 класса точности или дозаторы пипеточные.
· Микропипетки автоматические (на 5-80 мкл).
· Палочки стеклянные или пластиковые.
· Раствор (9 г/л) натрия хлористого в воде очищенной (дистиллированной или деионизированной).
· перчатки резиновые или пластиковые.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА
Тщательно перемешать реагент 1 до получения однородной суспензии. Реагенты 2 и 3 готовы к использованию.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Качественное определение
Выдержать все реагенты не менее 15 мин при комнатной температуре.
Нанести на первую ячейку слайда 20 мкл К+, на соседнюю ячейку – 20 мкл К–. На оставшиеся ячейки нанести по 20 мкл исследуемых образцов.
Легким встряхиванием флакона перемешать реагент 1 и внести по 20 мкл его в каждую ячейку с образцом. Плоским концом пипетки-мешалки (стеклянной палочкой) тщательно перемешать каждую каплю (распределить реакционную смесь по всей площади ячейки). Для каждой капли использовать новую пипетку-мешалку (стеклянную палочку).
Покачивать слайд (на шейкере или вручную) в течение 1 минуты, после чего сразу произвести учет результатов реакции.
В образцах, давших положительную РА в качественном исследовании, определить титр антител.
Определение титра антител
Приготовить в пробирках разведения исследуемого образца 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 и 1:320 в 9 г/л растворе натрия хлористого, для чего 100 мкл образца внести в пробирку с 1,9 мл раствора натрия хлористого, перемешать (разведение 1:20), отобрать 1,0 мл полученного разведения и внести в пробирку с 1,0 мл раствора натрия хлористого, перемешать (разведение 1:40), и так – до разведения 1:320; 1,0 мл последнего разведения удалить из пробирки.
Подготовить пробирки с контрольными образцами, для чего по 0,1 мл каждого образца внести в 0,9 мл 9 г/л раствора хлористого натрия, тщательно перемешать.
Легким встряхиванием флакона перемешать реагент 1 и добавить по 20 мкл в каждую пробирку с контрольными образцами и разведениями исследуемого образца.
Тщательно перемешать содержимое пробирок и поместить их на 24 ч в термостат при температуре 37 оС или на 2 ч при температуре от 48 до 50 оС для Н-антигенов или на 4 ч при температуре от 48 до 50 оС для О-антигенов, после чего произвести учет результатов реакции.
Учет и интерпретация результатов реакции
Результаты реакции учитывать при освещении не ниже 300 люкс.
Положительной РА (наличие в исследуемой пробе соответствующих антител) считается появление рыхлых хлопьев (Н-агглютинация) или плотных агрегатов (О-агглютинация) в прозрачной или мутной жидкости в пробирке.
Отрицательной РА (отсутствие в исследуемой пробе соответствующих антител) считается отсутствие признаков агглютинации (жидкость в пробирке остается мутной и однородной).
Результаты РА с исследуемыми сыворотками учитывать только при положительной реакции с К+ и отрицательной реакции с К–.
Титром антител к соответствующему антигену считается максимальное разведение исследуемого образца, в котором получена положительная РА.
Свидетельством текущей инфекции обычно считаются:
титры антител к Н-антигенам Salmonella ≥1:160,
титры антител к О-антигенам Salmonella ≥1:80,
титр антител к Brucella abortus ≥1:80,
титр антител к Proteus ОХ2 ≥1:20, к Proteus ОХ19 и ОХК ≥1:80.
Однако каждой лаборатории рекомендуется определить собственные уровни диагностических титров, учитывающие местные особенности.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 2 до 8 оС в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.
Все реагенты стабильны до окончания срока хранения, указанного на этикетках, при условии, что хранение осуществляется при температуре 2-8оС и приняты меры по предотвращению контаминации во время использования.
Транспортирование наборов должно производиться всеми видами крытого транспорта в соответствии с требованиями правилами перевозки грузов, действующими на данном виде транспорта, при температуре от 2 до 8 оС. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 24 оС в течение 3 сут. Замораживание не допускается.
Срок годности набора – 2 года.
Диагностикум ТИФИ
