ИФА-Мико-пневмо-IgG

Скачать Инструкцию 

Скачать РУ

Поделиться
Категории: , Метка:

ИФА-Мико-пневмо-IgG. № ФСР 2009/04111 от 27.02.2014
Набор реагентов Тест-система иммуноферментная для выявления антител класса G к Mycoplasma pneumoniae

 

ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов Тест-система иммуноферментная для выявления антител класса G к Mycoplasma pneumoniae “ИФА-Мико-пневмо-IgG”

Регистрационное удостоверение №ФСР2009/04111 от “27”02 2014 г.

 

НАЗНАЧЕНИЕ

Выявление и определение титра видоспецифических антител класса G к Mycoplasma pneumoniae в сыворотке (плазме) крови людей методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) при “ручной” постановке и с использованием ИФА-анализаторов.

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

Иммуносорбент лизатный инактивированный очищенный антиген  Mycoplasma pneumoniae, сорбированный  на 96-луночном разборном полистироловом планшете для иммунологических реакций с плоским дном (используются “ломающиеся” стрипы) 1 планшет
допускается раздельная упаковка стрипов (по 1-4 стрипа в пакете)
Контрольный положительный образец (К+) инактивированный, содержит антитела класса G к Mycoplasma pneumoniae в титре 1:600, прозрачная жидкость красного цвета 1 фл. (1,2 мл)
Контрольный образец уровня среза (К+пор) инактивированный; содержит антитела класса G к Mycoplasma pneumoniae в “пороговом” титре (1:100); прозрачная жидкость  желтого цвета 1 фл. (1,2 мл)
Контрольный отрицательный образец (К–) инактивированный; прозрачная жидкость зеленого цвета 1 фл. (1,2 мл)
Конъюгат антитела диагностические мышиные против иммуноглобулинов человека класса G , меченые пероксидазой; прозрачная жидкость розового цвета 1 фл. (13 мл)
25-кратный концентрат промывочного раствора [ПР(х25)] прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная пенящаяся жидкость, возможно выпадение осадка солей белого цвета, растворяющегося при температуре 37 0С в течение 30 мин 1 фл. (80 мл)

или

2 фл. (по 40 мл)
Раствор для разведения образцов (РРО) прозрачная жидкость синего цвета 1 фл. (100 мл)

или

2 фл. (по 50 мл)
Раствор индикаторный (РИ); прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость 1 фл. (13 мл)
Стоп-реагент прозрачная бесцветная жидкость. 1 фл.(12,5 мл)

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

2  ПР(х25), РИ, РРО, стоп-реагент – унифицированы для всех наборов ЗАО “ЭКОлаб”, в которых используются указанные реагенты.

Набор может быть дополнительно укомплектован:

вспомогательным планшетом для предварительного разведения

образцов (1 шт.),

вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.),

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.),

клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению и бланк калибровочного графика.

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовый вариант комплектации набора позволяет одномоментное исследование 96 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы  используется 6 лунок и 1 лунка – для выведения уровня “бланк” спектрофотометра). Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Число  стрипов 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Число иссл. обр. 1 2-9 10-17 18-25 26-33 34-41 42-49 50-57 58-65 66-73 74-81 82-89

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

При наличии в исследуемом образце антител класса G к Mycoplasma pneumoniae они связываются с антигеном, сорбированным на поверхности лунок полистиролового планшета, этот комплекс, в свою очередь, связывается с конъюгатом – антителами против IgG человека, мечеными пероксидазой хрена. Образовавшийся комплекс “антиген-антитело-конъюгат” выявляется по реакции с субстратом пероксидазы – тетраметилбензидином, в результате которой бесцветное содержимое лунок приобретает голубой цвет, изменение цвета регистрируется по оптической плотности раствора в лунке планшета с помощью спектрофотометра.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Диагностическая чувствительность набора при определении на сыворотках стандартной панели предприятия, содержащих антитела класса G к Mycoplasma pneumoniae – 100 %.

Диагностическая специфичность набора при определении на сыворотках стандартной панели предприятия, не содержащих антитела класса G к Mycoplasma pneumoniae – 100 %.

 

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Сыворотка (плазма) крови человека объемом не менее 10 мкл.

Образцы до исследования можно хранить не более 7 сут. при температуре от 2 до 8 оС или до 3 мес. при температуре минус 20 оС или более низкой. Допускается только однократное замораживание-размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать.

Не допускается использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов и (или) с признаками гемолиза, и (или) с видимым микробным проростом.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом отцентрифугировать в течение 10-15  мин при 2500-3000 об/мин.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Оборудование и материалы (для “ручной” постановки)

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин., термостат на 37 оС, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.

Приготовление рабочих  растворов реагентов для ИФА

Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре  от 18 до 25 оС.

Приготовление рабочих разведений исследуемых образцов

Возможны два способа приготовления рабочих разведений:

 

1 способ

По 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРО (разведение 1:100), тщательно перемешать пипетированием.

 

2 способ

Образцы вначале развести 1:10 во вспомогательном планшете, для чего внести в его лунки по 90 мкл РРО, затем внести в них по 10 мкл исследуемых образцов, тщательно перемешать пипетированием. Рабочее разведение (1:100) готовить непосредственно в лунках иммуносорбента (см. раздел Проведение ИФА (“ручная” постановка), п. 2).

Рабочие разведения образцов хранить не более 6 ч при температуре  от 18 до
25 оС.

Приготовление рабочего промывочного раствора  (ПР)

При выпадении осадка солей в ПР(х25) прогреть его при температуре  37 оС до  полного растворения осадка.

При постановках с использованием ИФА-анализаторов 80 мл ПР(х25) довести водой очищенной до 2 л.

При дробной “ручной” постановке использовать соотношения объемов ПР(х25) и воды, указанные в табл. 1 для разного числа используемых стрипов.

Таблица 1

Число стрипов 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
ПР(х25), мл 7 10 13 17 20 23 27 30 33 37 40
Вода очищенная, мл до 175 до 250 до 325 до 425 до 500 до 575 до 675 до 750 до 825 до 925 до 1000

Готовый рабочий промывочный раствор хранить при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Приготовление остальных реагентов

Иммуносорбент, К–, К+, К+пор, РРО, конъюгат, РИ, стоп-реагент – готовы к применению. После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 оС до истечения срока годности.

Проведение ИФА (“ручная” постановка)

Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.

  1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8 оС до истечения срока годности.
  2. В лунку А1 внести 100 мкл РРО, в следующие лунки внести по 100 мкл контрольных образцов (по 2 лунки на образец), оставшиеся лунки использовать для исследуемых образцов (по 1 лунке на образец), для чего внести в них:

при первом способе приготовления рабочих разведений исследуемых образцов – по 100 мкл готовых разведений;

при втором способе приготовления рабочих разведений исследуемых образцов – вначале по 90 мкл РРО, а затем – по 10 мкл образцов, предварительно разведенных 1:10 в лунках вспомогательного планшета, тщательно перемешать пипетированием.

  1. Планшет закрыть крышкой или клейкой пленкой. Инкубировать 30 мин при температуре от 21 до 250С в защищенном от света месте.
  2. С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 4 раза промыть планшет ПР, внося в лунки 350-370 мкл раствора. При наличии промывателя, позволяющего производить промывку в режиме “Overflow”, использовать именно этот режим. По окончании промывки остатки раствора удалить из лунок, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
  3. Во все лунки внести по 100 мкл конъюгата.
  4. Планшет закрыть крышкой или клейкой пленкой. Инкубировать 30 мин при температуре от 21 до 25оС в защищенном от света месте.
  5. С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 4 раза промыть планшет ПР, как указано в п. 4.
  6. Во все лунки внести по 100 мкл РИ, немедленно поместить планшет в защищенное от света место и инкубировать 10 мин при температуре от 18 до 25оС.
  7. Во все лунки (в той же последовательности, с которой вносился индикаторный раствор) внести по 100 мкл стоп-реагента, осторожно (постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок и не более чем через 10-15 мин приступить к учету результатов.

Регистрация и учет результатов

Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, выводя спектрофотометр на нулевой уровень (“бланк”) по лунке А1 и измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн – 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм оптическую плотность (ОП) измерять при длине волны 450 нм.

Результаты ИФА учитывать при следующих условиях:

среднее значение ОП в лунках с К+ не менее 0,6;

среднее значение ОП в лунках с К+пор не менее 0,2;

среднее значение ОП в лунках с К– не более 0,15.

В противном случае исследование необходимо повторить.

Учет результатов качественного определения

Исследуемые образцы учитывать как положительные при ОПобр больше
1,1хОП(К+пор).

Исследуемые образцы учитывать как отрицательные при ОПобр меньше
0,9хОП(К+пор).

Исследуемые образцы учитывать как сомнительные при ОПобр в диапазоне от 0,9хОП(К+пор) до 1,1хОП(К+пор), т.е. при 1,1хОП(К+пор)≥ОПобр≥0,9хОП(К+пор).

Образцы, оцененные как сомнительные, должны быть исследованы повторно. При повторном получении сомнительных результатов рекомендуется мониторинг иммунного статуса пациента для исключения неспецифических, в том числе перекрестных реакций, приводящих к сомнительным результатам.

 

Учет результатов полуколичественного определения

На бланке калибровочного графика (вкладывается в каждый набор) по оси абсцисс (логарифмическая шкала) отложить значения титров К+пор и К+, указанные в разделе “Состав набора”, а по оси ординат (пропорциональная шкала) – соответствующие им средние значения ОП, полученные в ИФА. По полученным точкам провести прямую линию.

По калибровочному графику определить титры иммуноглобулинов класса G в исследованных образцах как абсциссы точек, ординаты которых равны значениям ОП, полученным в ИФА.

ПОСТАНОВКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИФА-АНАЛИЗАТОРОВ

Подготовить прибор в соответствии с инструкцией по его эксплуатации, ввести программу анализа, соответствующую используемому набору, и провести анализ.

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ

Хранение – в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 оС. Замораживание не допускается.

Транспортирование – при температуре от 2 до 8 оС. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 оС в течение 10 сут.

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

 

По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться по адресу 142530 Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1. ЗАО “ЭКОлаб”; тел. (49643) 3-23-11, факс (49643) 3-30-93 – отдел сбыта, (49643) 3-37-30 – ОБТК.

 

 

КРАТКАЯ СХЕМА ПОСТАНОВКИ ИФА

(“ИФА-Мико-пневмо-IgG“)

 

Использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией!
Внести в лунку А1 – 100 мкл РРО;

в лунки B1, C1 – по 100 мкл К+,

в лунки D1, E1 – по 100 мкл К+пор,

в лунки F1, G1 – по 100 мкл К–,

в следующие лунки – по 100 мкл подготовленных исследуемых образцов (по 1 лунке на образец)
Инкубация 30 мин, 21-25 оС
Промыть 4 раза промывочным раствором
Внести по 100 мкл конъюгата в каждую лунку
Инкубация 30 мин, 21-25 оС
Промыть 4 раза промывочным раствором
Внести по 100 мкл индикаторного раствора в каждую лунку
Инкубация 10 – 15 мин, 21-25 оС
Внести по 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку
Измерить ОП при 450 нм (референс 620-650 нм), «бланк» – по лунке А1

 

Скачать Инструкцию 

Скачать РУ

ИФА-Мико-пневмо-IgG

Похожие товары