Среда АГВ Оболенск – Цена за упаковку 0,25 кг
ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для определения чувствительности к антибактериальным препаратам сухая» Среда АГВ Оболенск
- НАЗНАЧЕНИЕ
Среда АГВ Оболенск для определения чувствительности к антибактериальным препаратам сухая (далее – Питательная среда) предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом при проведении бактериологических исследований в клинической и санитарной микробиологии.
- характеристика препарата
Питательная Среда АГВ Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного, гигроскопичного порошка желтоватого цвета.
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. Принцип действия
Определение основано на образовании зон задержки роста вокруг дисков с антибактериальными препаратами чувствительными микроорганизмами и последующей регистрацией диаметров этих зон.
2.2. Состав, г/л:
| Панкреатический гидролизат рыбной муки …………………… | 21,0 |
| Пептон сухой ферментативный …………………………………. | 10,0 |
| Натрий хлористый ……………………………………………….. | 3,0 |
| Крахмал растворимый, индикатор ……..……………………….. | 1,5 |
| Агар микробиологический …………………………………………. | 12,0±3,0 |
- АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Питательная Среда АГВ Оболенск должна обеспечивать рост тест-штаммов: Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus АТСС 25923, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 в виде однородного не очень плотного газона с образованием четких соответствующего диаметра зон задержки роста вокруг дисков с антибактериальными препаратами (см. таблицу) через 18-20 ч инкубации посевов при температуре (36±1) С в соответствии с таблицей.
Таблица – Допустимые диапазоны значений диаметров зон задержки роста тест-штаммов микроорганизмов.
| № п/п | Антибактериальные препараты (АБП)
|
Содержание АБП в диске | Диаметры зон задержки роста, мм | ||
| S. aureus АТСС 25923 | E. coli АТСС 25922 | P. aeruginosa АТСС 27853 | |||
| 1 | Бензилпенициллин | 10ед | 29-38 | -*) | – |
| 2 | Карбенициллин | 100 мкг | 35-42 | 23-29 | 18-25 |
| 3 | Стрептомицин | 30 мкг | 20-25 | 14-22 | – |
| 4 | Неомицин | 30 мкг | 20-27 | 17-22 | – |
| 5 | Гентамицин | 10 мкг | 22-32 | 20-27 | 16-26 |
| 6 | Тетрациклин | 30 мкг | 22-31 | 17-26 | – |
| 7 | Эритромицин | 15 мкг | 22-31 | 8-15 | – |
| 8 | Левомицетин | 30 мкг | 19-25 | 19-27 | – |
| 9 | Полимиксин | 300 ед | – | 16-20 | 16-20 |
*) – определение с данными АБП не производят
- МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
При анализе исследуемого материала необходимо соблюдение требований СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
- ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Термостат, обеспечивающий температуру 35 – 37 °С
- Весы лабораторные 2 класса точности
- Автоклав
- Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
- Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
- Вода дистиллированная
- Колбы
- Диски с антибактериальными препаратами
- Пинцеты анатомические
- Отраслевой стандартный образец мутности (ОСО 42-28-85 П) 10 единиц соответствующего года выпуска
- АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Выделенные из клинического материала чистые культуры микроорганизмов.
- Проведение АНАЛИЗа и учет результатов
Анализ проводят в соответствии с МУК 4.2. 1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».
7.1. Приготовление среды
Препарат в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии Питательной среды, тщательно размешивают в 1л дистиллированной воды, кипятят 2 мин до полного расплавления агара, разливают по колбам и стерилизуют автоклавированием при температуре 121°С в течение 15 мин. После охлаждения до 45-50°С среду разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри диаметром 90 мм и по 25 мл среды в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм, устанавливая их на строго горизонтальную гладкую поверхность (выверенную по уровню). Соблюдение указанных предосторожностей связано с тем, что зоны задержки роста зависят от толщины и однородности агарового слоя. При использовании свежеприготовленных чашек или чашек после хранения в холодильнике их необходимо подсушить, соблюдая правила асептики, при температуре (36±1)°С с приоткрытой крышкой в течение 10-20 мин. Готовая среда в чашках прозрачная желтого цвета.
Готовую среду в чашках можно хранить в запаянных полиэтиленовых пакетах при 4-8°С в течение 7-10 сут.
7.2 Исследование образца
7.2.1 Приготовление инокулята
Выделенную культуру микроорганизма бактериологической петлей переносят в пробирки со стерильным 0,9% раствором натрия хлористого и доводят концентрацию микробной взвеси до 10 единиц по ОСО.
Стандартную микробную взвесь готовят путем десятикратного разведения (9,0 мл 0,9 % раствора натрия хлористого с 1,0 мл микробной взвеси) до разведения 10-1. В процессе разведения перенос взвеси в следующую пробирку производят новой стерильной пипеткой вместимостью 1мл.
7.2.2 Инокуляция чашек Петри со средой
Для инокуляции приготовленных чашек со средой 1,5-2,0 мл стандартной взвеси наносят на поверхность чашки Петри со средой и равномерно распределяют путем покачивания чашек. Избыток микробной взвеси удаляют стерильной пипеткой. Затем чашки подсушивают, приоткрыв крышки, при комнатной температуре в течение 10-15 мин.
7.2.3 Аппликация дисков и инкубация.
Не позднее, чем через 15 мин после инокуляции на поверхность питательной среды наносят диски с антибактериальными препаратами (АБП). Аппликацию дисков проводят с помощью стерильного пинцета. На одну чашку диаметром 90 мм помещают 4 диска с АБП, аккуратно прижав их пинцетом к поверхности среды. Чашки помещают в термостат сразу после наложения дисков и инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 18-20 ч. Увеличение интервала времени между нанесением дисков на поверхность среды и началом инкубации приводит к увеличению диаметра зоны подавления роста.
7.2.4 Учет результатов.
После окончания инкубации чашки помещают вверх дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 45°(учет в отраженном свете). С помощью штангенциркуля или специальной линейки измеряют диаметры зон задержки роста с точностью до 1 мм. Интерпретацию полученных результатов проводят в соответствии с МУК 4.2. 1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».
- УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Питательную среду (сухую) необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.
Срок годности – 2 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
По вопросам, касающимся качества «Питательной среды для определения чувствительности к антибактериальным препаратам сухой» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.
Среда АГВ Оболенск