Тест-система «Хантагност» – иммуноферментная система для определнеия хантавируса
Тест-система «Хантагност» предназначена для определения антигенов хантавирусов – возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом в органах и тканях животных, птиц и человека, а также в суспензиях членистоногих методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Тест-система «Хантагност» Выпускается в виде набора, который включает следующие компоненты:
Ÿ планшет для иммунологических реакций, полистироловый или полихлорвиниловый, монолитный;
Ÿ иммуносорбенты:
иммуноглобулин человека класса G (ИГ+), сухой, содержащий антитела к хантавирусу, аморфная масса белого цвета;
иммуноглобулин человека класса G (ИГ-) сухой, не содержащий
антител к хантавирусу, аморфная масса белого цвета;
Ÿ антиген хантавируса (АГ+), сухой, инактивированный, аморфная масса белого или светло-розового цвета;
Ÿ коньюгат, жидкий – иммуноглобулин человека класса G (IgG),
содержащий антитела к хантавирусу, коньюгированный с
пероксидазой хрена, вязкая, прозрачная жидкость;
* Взамен: Инструкции по применению, утвержденной 19 мая 1999 года
Ÿ Альбумин из бычьей сыворотки (БСА), стабилизатор, сухой
кристаллический порошок белого или светло-желтого цвета;
Ÿ Концентрат ( х100) фосфатно-солевого буферного раствора, (ФСБх100) – бесцветная прозрачная жидкость, возможно выпадение
осадка, растворяющегося при температуре от 300 до 400 С в течение
20 мин;
Ÿ Концентрат (х2) цитратно-фосфатного буферного раствора, (ЦФБ),
бесцветная прозрачная жидкость;
Ÿ Твин-20, жидкий;
Ÿ Хромоген – ортофенилендиамин (ОФД), таблетка серо-коричневого цвета;
Ÿ Стоп-реагент – серная кислота, 1 М раствор, бесцветная прозрачная жидкость;
Ÿ Гидроперит сухой, таблетка белого цвета.
Набор рассчитан на исследование 48 анализов, включая анализ
контрольного образца АГ+.
Назначение.
Тест-система «Хантагност» Выявление антигенов хантавирусов в органах и тканях животных, птиц и человека, а также в суспензиях членистоногих, для использования in vitro.
Способ применения
1. Приготовление рабочих растворов и реагентов:
1.1. Рабочий раствор ФСБ. ФСБ (х100) разводят до 1 л дистиллированной водой. Раствор предназначен для растворения ИГ+, ИГ- (10 мл), и является исходным для приготовления раствора для отмывания планшета (ФСБ-Т) и раствора для разведения коньюгата (1% раствор БСА в ФСБ-Т). Хранят при температуре 2-8 0С в течение 3 сут.
1.2. ФСБ-Т – во флакон с 0,5 мл твина-20 добавляют 5,0 мл рабочего раствора ФСБ, и смесь осторожно перемешивают до получения
однородного раствора, не допуская образования обильной пены.
Полученный раствор переносят пипеткой в оставшийся объем (985 мл)
рабочего раствора ФСБ. Раствор предназначен для отмывания
планшета и для приготовления 1%-ного раствора БСА в ФСБ-Т. Хранят
при температуре 2-8 0С в течение 4 сут.
1.3. ФСБ – БСА – к 10 мл раствора ФСБ-Т добавляют содержимое флакона с БСА и, не встряхивая, оставляют при комнатной температуре до полного растворения белка. Раствор предназначен для разведения коньюгата. Готовят перед употреблением.
1.4. ЦФБ – к ЦФБ (х2) добавляют 6,0 мл дистиллированной воды и перемешивают. Раствор предназначен для приготовления раствора хромогена. Готовят перед употреблением.
1.5. Перекись водорода – таблетку гидроперита растворяют в 3 мл дистиллированной воды. Полученный раствор перекиси водорода готовят перед употреблением.
1.6. АГ+ – раствор АГ+ получают добавлением во флакон воды в объеме указанном на этикетке. Готовят непосредственно перед употреблением.
1.7. ИГ+, ИГ – – во флаконы с препаратом добавляют по 5,0 мл приготовленного раствора ФСБ. Растворы предназначены для сорбции планшета.
2. Проведение ИФА.
2.1. Сенсибилизация лунок планшета: планшет располагают согласно рекомендуемой схеме, т. е. вертикально так, чтобы буквы (от Н до А) находились вверху, а нумерация рядов (от 1 до 12) – справа (см. схему). Вносят по 0,1 мл рабочего разведения анти-хантавирусного IgG (ИГ+) человека в нечетные ряды лунок и по 0,1 мл рабочего разведения
нормального IgG человека (ИГ-) – в четные ряды лунок. Планшет накрывают
крышкой и выдерживают в холодильнике при температуре 4 – 8 0С в течение 16-20 ч, или при температуре 37 0С в течение 3 ч.
2.2. Промывание лунок планшета: после инкубации содержимое лунок удаляют и лунки трижды промывают раствором ФСБ-Т, заполняя их до края и сразу же удаляя раствор. Планшет подсушивают постукиванием по 2-3 слоям фильтровальной бумаги до удаления видимых капель.
2.3. Внесение исследуемых образцов: в лунки планшета вносят по 0,05 мл исследуемых образцов суспензий, начиная от буквы Н до А – один образец в две вертикально расположенные лунки – с ИГ+ и ИГ-, а в последнюю пару лунок (А-11 и А-12) вносят по 0,05 мл контрольного антигена хантавируса. Панель накрывают крышкой и выдерживают в холодильнике при температуре 4 – 8 0С в течение 16-20 ч, или при температуре 37 0С в течение 2 ч.
2.4. Промывание лунок планшета: после инкубации содержимое лунок удаляют и лунки 5 раз промывают раствором ФСБ-Т, заполняя их до края (1-й раз сразу же удаляя раствор, а последующие 4 раза, выдерживая с раствором по 5 мин). Планшет подсушивают постукиванием по 2-3 слоям фильтровальной бумаги до удаления видимых капель.
2.5. Приготовление рабочего разведения коньюгата: раствор для разведения коньюгата (1% р-р БСА в ФСБ-Т см. п. 1.3.) в объёме 6,4 мл вносят по флакон, содержащих пероксидазный коньюгат и тщательно перемешивают. Коньюгат в рабочем разведении не хранить, использовать сразу!
2.6. Внесение коньюгата: по 0,05 мл рабочего разведения перокисдазного коньюгата вносят по все лунки планшета. Планшет накрывают крышкой и выдерживают при температуре 37 0С в течение 1 ч.
2.7. Приготовление раствора хромогена: ОФД растворяют при перемешивании в 12 мл ЦФБ в течение 1-2 мин в темном месте. Непосредственно перед внесением в лунки к приготовленному раствору ОФД при перемешивании 0,01 мл раствора перекиси водорода.
2.8. Промывание лунок планшета: после инкубации содержимое лунок 37 0С удаляют и лунки 6 раз промывают раствором ФСБ-Т, заполняя их до края (1-й раз сразу же удаляя раствор, а последующие 5 раз, выдерживая с раствором по 5 мин). Планшет подсушивают постукиванием по 2-3 слоям фильтровальной бумаги до удаления видимых капель.
2.9. Внесение раствора хромогена: приготовленный раствор хромогена немедленно вносят по 100 мкл во все лунки планшета, который затем в условиях полной темноты выдерживают при комнатной температуре в течение 30 – 50 мин.
2.10. Стоп реагент: реакцию останавливают внесением во все лунки план-шета по 50 мкл стоп-реагента. Результат учитывают не позднее 30 мин.
Учет результатов Тест-система «Хантагност».
Результат учитывают спектрофотометрически по оптической плотности (ОП) при длине волны 492 нм. Положительной считают пробу в случае, когда ОП лунки с ИГ+ превосходит ОП лунки с ИГ- в 2,1 и более раз.
Форма выпуска.
Тест система «Хантагност» выпускается в наборе из 12 компонентов:
Ÿ Планшет для иммунологический реакций – 1 шт.
Ÿ Иммуносорбенты:
Иммуноглобулин человека класса G, содержащий антитела
к хантавирусу (ИГ+), сухой – 1 флакон (0,1 мл)
Ÿ Антиген Хантавируса (АГ +), сухой, инактивированный 1 флакон (0,1 мл)
Ÿ Коньюгат, жидкий 1 флакон (5 или 20 мкл)
Ÿ Альбумин из бычьей сыворотки, сухой 1 флакон (0,1 г)
Ÿ Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора
(ФСБ х100) 1 флакон (10,0 мл)
Ÿ Концентрат (х2) цитратно-фосфатного буферного раствора
(ЦФБ) 1 флакон (6,0 мл)
Ÿ Твин-20, жидкий 1 флакон (0,5 мл)
Ÿ Хромоген (ортофенилендиамин) ОФД – 1 флакон (5,0 мг);
Ÿ Стоп-реагент – серная кислота, раствор 1М – 1 флакон (5,0 мл);
Ÿ Гидроперит, сухой – 1 табл
Ÿ Инструкция по применению – 1 шт.
Срок годности Тест-система «Хантагност» – 2 года.
Тест система с истекшим сроком годности применению не подлежит.
Условия отпуска Тест-система «Хантагност». Для лечебно-профилактических и санитарно-
профилактических учреждений.
Транспортирование: в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 0С. Допускается транспортирование при температуре до 250С в течение не более 2-х сут.
Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 в сухом помещении при температуре от 2 до 8 0С в недоступном для детей месте.
