Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для выделения возбудителей гнойных бактериальных менингитов, готовая к применению» (Шоколадный агар Оболенск) предназначен для бактериологических исследований в клинической микробиологии с целью культивирования и выделения бактерий Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis из клинического материала.

Представляет собой непрозрачный гель светло-коричневого цвета.

Состав:

Основа: панкреатический гидролизат казеина, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, дрожжевой экстракт, пептон мясной, гемоглобин, натрий хлористый, крахмал растворимый, калий фосфорнокислый двузамещённый, агар, вода дистиллированная.
Ростовая Добавка (РД-ША): цистеина гидрохлорид, L-глутамин, аденин, никотинамидадениндинуклеотид, цианокобаламин, тиамина пирофосфат.
Селективная Добавка для выделения гемофильной палочки (СД-Г): амфотерицин B, бацитрацин, ванкомицин.
Селективная Добавка для выделения пневмококков (СД-П): амфотерицин B, полимиксин B, налидиксовой кислоты натриевая соль.
Селективная Добавка для выделения менингококков (СД-М): амфотерицин B, полимиксин B, ванкомицин.

Характеристика:

Основа обогащена фактором Х, необходимым для роста гемофильной палочки. V-фактор, также необходимый для роста бактерий рода Haemophilus содержится в РД-ША в виде никотинамидадениндинуклеотида. Кроме того, РД-ША содержит ряд веществ, стимулирующих рост пневмококков и менингококков. Совокупность компонентов, входящих в состав набора, обеспечивает рост основных возбудителей гнойных бактериальных менингитов и ингибирование микробов-ассоциантов при применении соответствующих селективных добавок.

Подготовка питательной среды.

Подготовка раствора ростовой добавки:

Выдержать флакон с РД-ША до достижения комнатной температуры. В асептических условиях растворить содержимое флакона с РД-ША в 2мл стерильной дистиллированной воды и перемешайте до полного растворения.

Приготовление чашек со средой:

Не вскрывая, поместите флакон с Основой на водяную баню с температурой (50±5)°С и поднять температуру до (95±5)°С, выдержать приблизительно 30-40 мин до полного расплавления агара. Возможно расплавление Основы в автоклаве в режиме «стерилизация текучим паром». Основу перемешать и охладить до 45-50^оС. Вскрыть бутылку с Основой и внести в нее подготовленный раствор РД-ША. Для приготовления селективных вариантов питательной среды вместе с РЛ-ША внести одну из селективных добавок СД-Г или СД-П, или СД-М, в зависимости от микроорганизмов, с которыми предстоит работать, из расчета на 1 бутылку Основы 1 флакон селективной добавки, предварительно растворив ее в 2 мл стерильной дистиллированной воды.

Растворы РД-ША и селективных добавок не хранить, использовать немедленно. Перемешать и разлить в чашки Петри слоем 4-5 мм.

Чашки с готовой средой можно хранить при температуре (6±2)°С не более 7 дней без заметного изменения ростовых свойств.

Проведение анализа:

Исследования образцов проводят в соответствии с рекомендациями, изложенными в МУК 4.2.1887-04 «Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов».

Учет результатов проводят визуально по наличию характерных колоний через 24-48 ч инкубации при температуре (37±1)°С в микроаэрофильных условиях:

– штаммы Haemophilus influenza формируют слизистые, сочные, полупрозрачные, гладкие колонии сероватого цвета диаметром 1-2 мм. Для чистой культуры гемофильной палочки характерно наличие специфического «мышиного» запаха.
– культура Streptococcus pneumonia растет в виде прозрачных, не склонных к слиянию колоний, которые могут быть как выпуклыми, так и плоскими с центральным углублением, диаметром до 0,5 мм. В зоне роста наблюдается изменение цвета питательной среды до зеленого цвета.
– штаммы Neisseria meningitides формируют полупрозрачные, выпуклые с ровными краями колонии диаметром 1,0-1,5 мм.

Условия хранения:

Основу хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 25оС. РД-ША и селективные добавки хранить в герметично закрытой упаковке при температуре (6±2)°С.

Упаковка: стеклянные флаконы.

Фасовка набора:

готовая стерильная основа – 4 бутылки 100 мл
стерильная ростовая добавка – 4 флакона
селективная добавка для выделения гемофильной палочки – 1 флакон на 100 мл основы
селективная добавка для выделения пневмококков – 1 флакон на 100 мл основы
селективная добавка для выделения менингококков – 1 флакон на 100 мл основы.

Шоколадный агар Оболенск